血迹遗留时间推断技术现状与展望-莫斯科世界杯-世界杯决赛结果_世界杯队伍

血迹是暴力犯罪现场最重要的物证之一。通过血迹形态分析、DNA分析能够还原犯罪现场、确定与暴力犯罪过程相关的人员，但通过血迹准确推断案件发生时间仍然是一个难题。现场血迹遗留时间（老化时间）通常指从血液通过破损血管转移至现场客体开始至该血迹被侦查发现的时间间隔。现场血迹遗留时间的推断可以帮助推断损伤的发生时间，从而还原暴力事件的案发时间，为缩小侦查范围提供重要依据。早在100多年前，就有研究人员尝试推断血迹遗留时间[1]。1910年，LEERS[2]提出了血液老化的生理学基础，使血迹遗留时间推断有了理论支撑。此后，血迹遗留时间推断的新理论与新方法不断涌现，逐渐形成了基于图像特征、生物化学特征的血迹遗留时间推断方法。本文拟对该领域主要方法进行总结，以期为血迹遗留时间推断的进一步研究提供参考和启示。

1 基于图像特征推断

图像分析法是基于血迹图像的时序性变化规律（如血迹色泽与干燥程度变化）进行遗留时间推断。现场遗留的血迹受环境、客体等因素的影响，某些结构与颜色特征常随遗留时间呈现规律性的变化。通过肉眼观察，对不同干燥阶段血迹的裂纹比、血池比率（液态血液区域面积占比）、干燥纹线等指标进行分析比对，可推断血迹遗留时间。尽管通过观察血迹色泽和干燥程度是最早应用于血迹形成时间推断的方法，但该法过于依赖侦查人员的经验，主观性较强，且能推断的时间范围有限。

温永启[3]使用立体显微镜观察了滴落血迹在24 h内的变化，结果发现，血迹干燥过程中的特征指标，如干燥纹线、内外环形成与时间关联性强，干燥规律稳定可靠。钱尊磊等[4]对血迹72 h内的干燥情况进行拍照观察，运用ImageJ图像处理软件量化分析平均灰度值、血池比率和裂纹比率3项特征性指标与遗留时间的相关性，建立了上述特征性指标随时间变化的回归方程。CHOI等[5]使用手机对血迹干燥过程进行拍照分析，选取裂纹、血池（液态血液区域）、颜色3项特征指标，在48 h内成功判定了血迹的遗留时间，可准确区分血迹图像差异。

血液离开人体后由于血红蛋白的氧化，颜色逐渐加深，由鲜红色逐渐变成深红色直至黑褐色。肉眼对于颜色的灵敏度有限，因此有学者尝试通过红绿蓝色彩模式（RGB）、印刷四分色模式（CMYK）、色相-饱和度-明度（HSV）色彩模式等血迹颜色参数推断血迹遗留时间。此类方法可嵌入手机或其他移动终端，实现血迹遗留时间现场快速推断。THANAKIATKRAI等[6]使用手机对不同客体的血迹进行拍照，提取血迹图像的CMYK色值进行时间相关性分析，推断42 d内的血迹，误差率为12%。SHIN等[7]研发了一种便携式勘察设备（Smart Forensic Phone），将血迹的RGB值转换为HSV色彩模式中的V值，根据V值与时间的曲线计算血迹遗留时间，血迹遗留时间低于42 h时，此方法有较高的准确率。郑吉龙等[8]研发出一体化微量血痕成像及遗留时间分析装置，能动态监测血迹6项颜色参数（RGB中的R、G、B与CMYK中的C、Y、M）随时间的变化，并建立了多参数方程进行血迹遗留时间推断，该装置在密闭环境下的准确率可达95%。

附表1汇总了基于图像特征推断血迹遗留时间的相关文献[3-7，9]，这些方法能快速分析现场血迹，但结果可能受到光源、成像工具和血液供体等多种因素的影响。因此，在实际应用中，需要综合考虑各种因素，以提高判断的准确性。

2 使用仪器分析方法推断

随着现代分析仪器的发展，越来越多的高灵敏度、高重现性、高选择性的仪器分析方法被应用于法庭科学领域，解决血迹遗留时间的问题。血液中成分复杂，体外环境下会发生降解，使用仪器分析可以较为精确得知血液成分或其降解产物随时间变化的规律，以此推断血迹遗留时间。

2.1 色谱法

色谱法是利用不同组分与固定相和流动相之间的作用力的差别实现各组分相互分离的分析方法。随着代谢组学的发展，人们对血液小分子代谢路径底物和产物的了解不断加深，研究人员尝试通过色谱-质谱技术定性描述和定量表征血液基质中小分子代谢组，以阐明血液成分与血迹遗留时间的关系。与大分子母体物质相比，血液中的代谢或降解产物往往在相对更长的时间内具有更好的稳定性，因此，代谢产物分析在血液遗留时间推断方面具有比母体物质更大的潜力[10]。附表2汇总了色谱法推断血迹遗留时间的相关文献[10-15]。

LEE等[11]使用LC-MS/MS对血液中的麦角硫因进行分析，证实了其可以用于血迹遗留时间推断，并能判断血迹是否形成21 d以上。SEOK等[12]使用HPLC-MS/MS分析了21 d内的血迹代谢物变化情况，发现焦谷氨酸、L-异亮氨酸、次黄嘌呤、L-色氨酸、麦角硫因5种代谢物浓度随着时间的推移规律性增加或减少，首次利用代谢组学方法寻找血迹遗留时间的标志物。2022年，LEE等[10]利用LC-MS/MS分析了7 d内血迹中多种代谢物含量的变化情况，选择N-乙酰半胱氨酸、焦谷氨酸、L-谷氨酰胺、腺苷酸二钠盐作为标志物，各标志物含量随血迹遗留时间的延长呈规律性下降。HEO等[13]使用LC-MS/MS分析了血液中血红蛋白β亚单位随时间的变化，结果显示，β蛋白的表达随时间逐渐增加，最终得到了30 d内血迹中β蛋白含量图，可以此推断血迹遗留时间。SCHNEIDER等[14]使用HPLC-MS分析了56 d内的血迹样本，采用蛋白质组学技术研究干燥血迹中蛋白质组含量的时间依赖性变化，这些蛋白质显示出不同的遗留时间聚类，该研究还建立了基于肽水平的推断模型，平均推断性能在70%~130%。

2.2 光谱分析法

光谱分析法是利用血液中物质对电磁辐射的吸收或发射现象确定物质的结构和化学成分的分析方法。血液在体外降解的过程中，血红蛋白、高铁血红蛋白和氧合血红蛋白之间的比例不断发生变化，导致血液颜色由鲜红色转变为暗红色，受此启发，许多研究人员利用光谱技术分析血液成分随时间的变化规律，进而推断血迹的遗留时间。光谱技术能够在短时间内生成大量的数据，对血迹的物理化学性质作出详细描述。其获得的光谱数据是血液中所有光学活性成分与其浓度加权的叠加，由于全血中红细胞的光学特性比其他血液成分高2~3个数量级，且血红蛋白占红细胞干重的90%，故血液光谱变化主要反映的是血红蛋白的变化规律[16-17]。因此，如何从大量数据中提取有用的信息，是光谱法推断血迹遗留时间所面临的一大难题。为了解决这个难题，大部分研究人员采用化学计量学方法以快速、准确地提取有用的信息。同时，由于大部分光谱法具有无损、非接触、简单、快速等显著优点，使得光谱技术在血迹遗留时间推断中的应用较为普及[18]。附表3汇总了光谱法推断血迹遗留时间的相关文献[19-36]。

2.2.1 高光谱成像技术

高光谱成像技术是一种基于窄波段的影像数据技术，将成像技术与光谱技术相结合，探测目标的二维几何空间及一维光谱信息，获取高光谱分辨率的连续、窄波段的图像数据。GIULIETTI等[19]通过高光谱成像技术测定385 h内的血迹，建立了血迹形成时间推断模型，绝对误差小于6.9 h。

2.2.2 荧光光谱法

荧光分子受到较短波长的光照射后，会吸收能量并将其储存起来，随后，储存的能量会以较长波长的荧光形式缓慢释放出来。荧光寿命是指荧光分子从受激发后到荧光消失的时间，是荧光物质的固有属性，会受到其所处微环境的影响。血液蛋白质中主要内源性荧光团为色氨酸，其荧光寿命对蛋白质构象高度敏感[37]。在血迹体外降解过程中，血液蛋白（如白蛋白、丙种球蛋白）发生结构变化，导致色氨酸荧光寿命减少[38]。据此，GUO等[21]利用犬血提出了一种基于血液荧光寿命推断血迹遗留时间的方法，结果表明，血液体外分解过程是非线性的，荧光寿命从新鲜血液的4.0 ns降低到2个月血迹的2.5 ns，在前150 h荧光寿命变化最为剧烈，约300 h后达到平稳。GUO等[39]在另一项研究中证实，利用荧光寿命推断血迹遗留时间时，犬血可作为人血替代物，同时改进了先前基于溶液的测定方法，使其对干燥血液同样适用。SHINE等[22]使用荧光寿命分光荧光仪检测1 200 h内的血迹荧光寿命，能够在91 h内准确区分新旧血液。

2.2.3 紫外-可见分光光度法

利用物质在紫外及可见光谱区域的吸收特性而建立的分析方法称为紫外-可见分光光度法。该方法可以区分蛋白质中肽键、侧链上的氨基酸以及辅基3种不同类型的发色团。辅基中往往含有卟啉结构，在紫外-可见光谱区域内存在Q波段和Soret波段。因原卟啉环与周围环境的相互作用，血红蛋白的紫外-可见光谱表现出高度敏感的特点，可以用来推断血迹遗留时间[40]。HANSON等[23]建立了一种利用血红蛋白紫外-可见光谱推断血迹遗留时间的方法，随着时间的增加，血红蛋白Soret波段出现蓝移（蓝移的程度是环境相对湿度和温度的函数）。COSSETTE等[24]使用可见光谱对15 d内的血迹进行检验，发现Soret波段和alpha波段的最大吸光度波长随时间呈负增长趋势。

2.2.4 红外光谱法

物质吸收特定波长的光能引起分子振动和转动能级跃迁，产生红外吸收光谱。利用红外光谱进行定性定量分析的方法称为红外光谱法。不同官能团产生的吸收谱带位置不同，故该方法可有效鉴定有机化合物并进行结构分析。使用红外光谱法可以对血迹中的蛋白质进行结构与含量变化分析，推断其与时间的依赖关系。吴雪梅等[26]使用衰减全反射傅里叶变换红外光谱法（attenuated total reflection-Fourier transform infrared spectroscopy，ATR-FTIR）采集血液光谱数据，发现3 d内血迹的老化过程可明显分为干燥和分解两个阶段。干燥阶段，光谱变化主要是由于血液中水分的挥发，约40 min后血迹完全干燥进入分解阶段，该阶段的光谱变化不明显。EDELMAN等[27]使用近红外光谱法对77 d内的血迹进行测定，建立了偏最小二乘回归模型。KUMAR等[28]利用ATR-FTIR技术结合化学计量方法，基于175 d内血迹的训练数据集，建立了多种血迹遗留时间的推断模型，其中多元线性回归、偏最小二乘回归模型的误差分别为2~4 d和3~5 d。

2.2.5 拉曼光谱法

拉曼光谱法是应用拉曼散射效应，对与入射光频率不同的散射光谱进行分析，以得到分子振动、转动方面的信息，并应用于分子结构研究的一种分析方法。拉曼光谱技术无需样品处理就能提供有关结构与分子变化的直接信息，故在法庭科学领域拥有良好的应用前景。拉曼光谱对血红素的化学修饰以及血红蛋白的变性与聚集转化十分敏感，在血迹检验方面具有独特优势[31]。LEMLER等[41]使用拉曼光谱分析发现，血迹形成2周后，在667、747和1 248 cm-1处出现新的谱带，而在419、570和1 638 cm-1处的Fe-O2标记消失。DOTY等[32]采用拉曼光谱技术结合二维相关光谱和统计建模方法，对保存1个月至2年的血迹进行分析，结果表明，特定拉曼带和血迹遗留时间之间有很高的相关性，能够在一定范围内区分新旧血迹。GAUTAM等[33]利用拉曼光谱分析了遗留2周的血迹，得到的特异性回归模型获得了较低的推断均方根误差和较高的R2。

2.2.6 漫反射光谱法

在漫反射光谱中，光源发射的光线照射到物质表面，一部分光线被表面直接反射回来，另一部分光线则进入物质内部并被散射。这些散射光的光谱信息携带着关于物质分子结构和性质的信息。通过收集和分析这些光谱信息，可以推断出物质的分子结构、化学键类型、官能团等。BREMMER等[42]使用可见漫反射光谱法通过多组分光谱拟合技术，精确量化血迹中发色团的含量，建立了发色团含量与血迹遗留时间的关系。LI等[35]使用可见漫反射光谱分析37 d内的马血，建立了推断1~37 d血迹遗留时间的线性判别模型，准确识别率最高达99.2%。

3 使用实时荧光定量PCR法推断

随着分子生物学的发展，研究人员发现血液细胞中一些分子水平（如DNA、mRNA）的变化与时间密切相关。血液完全干燥后，失去了DNA降解反应的溶剂环境，从而抑制了微生物的进一步分解活动[43]，故在血迹中，DNA的稳定性远高于血红蛋白的稳定性。有研究[44-45]证实，可以从多年的血迹中提取出适合进行PCR分析的RNA。血液细胞体外死亡后，DNA、RNA会在内源性核酸酶、水解酶的作用下降解。根据遗传物质的降解规律，可使用实时荧光逆转录定量聚合酶链反应（reverse transcription-quantitative polymerase chain reaction，RT-qPCR）检测血液细胞中的遗传物质，推断血迹遗留时间。ANDERSON等[46]认为，不同种类RNA在体外降解速率不同，并将其降解速率的不同归因于结构差异，如β-actin mRNA不与任何蛋白复合物结合，不具有环境保护作用，而18S rRNA在较大的核糖体结构中受到保护，不易降解，为使用实时荧光定量PCR法推断血迹遗留时间提供了理论基础。之后ANDERSON等[47]利用多重RT-qPCR技术证明了对不同RNA片段变化率的多变量分析可以用于区分不同遗留时间的血迹。附表4汇总了使用实时荧光定量PCR方法推断血迹遗留时间的相关文献[44，47-51]。

CHENG等[52]采用RT-qPCR技术检测血迹中节律性mRNA含量，建立了其与时间的回归模型，平均绝对误差为3.92 h。许炎等[48]利用RT-qPCR技术检测18S rRNA和β-actin mRNA的扩增状况并对产物进行定量分析，通过检测这两种目标物含量的变化趋势推测血迹遗留时间，结果显示，8~15 d内，18S rRNA与β-actin mRNA的比值与死亡时间存在一定的线性关系。QI等[49]也利用RT-PCR技术检测了存放4周内血迹中18S rRNA和β-actin mRNA的含量，发现两者的比值与时间呈线性关系。WEI等[50]利用RT-qPCR技术检测血迹中高表达的circRNA、内参基因及血液特异性mRNA标志物的相对表达水平，结果显示，circRNA和mRNA均呈线性持续降解，最终得到使用特殊RNA相对表达水平推断血迹遗留时间的模型，R2 最高可达0.907。

不同推断方法有各自的缺点与优点，可以将不同方法联用，使其结果相互印证，以得到更准确的推断结果。COSSETTE等[24，30]将DNA浓度和血红蛋白的吸光度整合到单一模型中，R²最高可达0.84。

4 影响血迹遗留时间推断的客观条件

时间固然是血液体外分解过程中的重要影响因素，但其并非唯一的决定性因素，其他诸如温度、湿度、客体、环境中的微生物[53]以及血液供体[49，54-56]等同样在血液体外分解的过程中起着至关重要的作用。实验室条件与实际应用场景的差异也降低了部分结果的可信度。如何量化并消除客观因素对推断结果的影响是解决推断误差的关键所在。

4.1 环境

现场的温度、湿度、光照、空气流通、环境微生物等因素均会对血迹的体外降解产生影响，是建立通用的血迹遗留时间推断方法最主要的障碍之一[1]，其中温度与湿度对血液体外降解的影响最大。温度升高会加速血液物质降解，HANSON等[23]发现，温度升高不仅提高了血迹降解的速率，还增加了血迹降解的程度。BREMMER等[57]发现，血红蛋白自氧化生成高铁血红蛋白的过程不受湿度影响，而高铁血红蛋白降解为血红蛋白的过程则高度依赖于湿度。HENEGHAN等[51]分析了环境温度和湿度对血迹RNA降解速率的影响，发现温度或湿度的升高以相近的程度加速血迹RNA的降解。然而，ZHANG等[34]使用拉曼光谱法分析温度、湿度对血迹体外降解过程中光谱峰的影响，发现温度的升高会加速光谱峰的变化，而湿度的增加总体上减缓了光谱峰的变化。

此外，不同的光源以及照射时间等多种光照因素均对血迹体外降解过程有一定影响。THANAKIATKRAI等[6]和FUJITA等[58]在实验中发现，阳光照射可以加速血迹体外降解的过程，然而BAUER等[44]发现，阳光照射对血迹体外降解过程没有显著影响。

通风环境会加速血液的干燥过程，郑吉龙等[8]研发的一体化微量血痕成像及遗留时间分析装置在通风环境下的推断准确率显著低于密闭环境。

在准确控制温度与湿度的条件下，现有方法均有良好的准确率，其中光谱法表现最为出色。在避光条件与荧光灯照射条件下，颜色参数方法表现出相同的准确率，但均高于阳光直射条件下的准确率[6，9]。然而拉曼光谱法光照条件下的准确率却高于避光条件[34]。

现将部分血迹遗留时间推断方法适用的环境条件汇总如下：

（1）色谱法。湿度越高（30%~90%）准确率越高[13，15]，但在相对湿度90%的条件下，血迹存在被真菌感染的可能性，会对推断结果造成较大影响[13]。

（2）紫外-可见光谱法。温度一定时，湿度越低（相对湿度50%~90%）准确率越高；相对湿度一定时（50%），温度22 ℃条件下的准确率最高[23]。

（3）拉曼光谱法。温度改变（4~37 ℃）对结果的规律性影响不大，湿度太高或太低均会降低准确率[34]。

（4）实时荧光定量PCR法。在温度4~37 ℃、湿度10%~75%条件下，温度越高，湿度越高，其推断效果越好[51]。短期的紫外线照射不会对推断结果造成显著影响[44]。

由于环境影响因素的差异性与复杂性，开发一种适用于犯罪现场可能遇到的各种环境的时间推断模型几乎是不可能的。但在实验室条件下，固定条件越多，所得到的推断模型就越准确。明确各种环境因素对血液降解的具体影响机制，有助于针对不同案发现场制定有效的应对策略。

4.2 客体

犯罪现场发现的血迹会滴落在不同类型的客体上，可分为渗透性客体、半渗透性客体和非渗透性客体三类。有研究[6，28，33]比较了不同客体对血迹遗留时间推断的影响，结果表明，血液在渗透性客体上的干燥速度更快，血液与客体的相互作用可能会导致血液体外分解产物更加复杂。底物的颜色对光谱分析法推断结果通常具有较大影响。EDELMAN等[27]评估了彩色棉花客体对近红外光谱推断血迹遗留时间的影响，1个月内的推断均方根误差为8.9%，但其只能应用于不同颜色的棉花客体，并不能直接用于其他客体。BERGMANN等[59]提出使用蒸馏水溶解不同客体上的血迹，再使用吸收光谱分析推断血迹遗留时间，从而达到忽略客体影响的目的。GIULIETTI等[19]利用高光谱成像技术开发了一个不依赖客体的血迹形成时间推断模型，在385 h内有较低的平均绝对误差。实验室研究常用铝板[31，34，60]、玻璃[28-29，61-62]、棉织物[44，49-50，58，63]、纸张[10-13，15，58]等作为血迹客体。

针对环境因素与底物因素的影响，在相同环境、相同客体上进行侦查实验，模拟犯罪现场中血迹的降解情况，可以对血迹遗留时间进行更可靠的推断。

4.3 抗凝剂

新鲜血液在体外环境中1 min左右便会凝固。因此，研究使用的血迹中部分添加了抗凝剂，如EDTA、肝素、柠檬酸盐等。然而，实际案件中的血迹几乎都不含抗凝剂，因此实验室条件下得到的数据结果是否可以直接应用于实际案件目前还没有定论。

BAUER等[44]通过研究证实，抗凝剂EDTA对RNA降解没有显著影响，是因为二价阳离子对核糖核酸酶的影响远低于对脱氧核糖核酸酶或其他DNA和RNA修饰酶的影响，同时，干燥血迹中的RNA片段化可能是由物理影响或自然氧化造成的，而非核糖核酸酶的直接作用。BERGMANN等[25]使用紫外-可见光谱法探讨EDTA随时间推移对血液光谱的实际影响，发现EDTA对氧合血红蛋白向高铁血红蛋白的转化具有显著影响，而对高铁血红蛋白向血红蛋白的转化有轻微影响，即EDTA可以延缓血液的老化。THANAKIATKRAI等[6]的研究发现，在使用颜色参数推断血迹形成时间的过程中，EDTA与肝素不会对实验结果产生影响。可见，抗凝剂对血迹老化过程存在不确定性，不同的抗凝剂对不同方法也有不一样的影响。因此，在不能确定抗凝剂是否对某检测方法存在影响时，最好使用不添加抗凝剂的血液作为研究样品，尽量缩短从血液采集到制作血液样本的时间。

5 展望

为了实现血迹遗留时间的准确推断并应用于实际场景，建议在以下方面开展相关工作，包括建立更精准的多元数学模型，考虑更多的变量，以更全面地解读血迹降解过程；优化数据分析和解释的策略，充分利用近年来快速发展的化学计量方法；开发新技术和新工具，以便更有效地处理血迹样本；广泛采纳并整合多学科的研究方法，以便提供更全面的视角和更精确的结果。

环境条件的不同会显著影响血迹遗留时间推断方法的准确率，每一种具体的现场环境都有其最佳的推断方法。然而，目前尚缺乏一套完整的、适用于各种常见环境的血迹遗留时间推断方法体系库。因此，未来的研究应聚焦于常见犯罪现场环境，采用多种方法进行血迹遗留时间的推断实验，以便筛选出该环境条件最适宜的推断方法，再将不同环境条件的数据整合为大型数据库，以便未来在面对不同的现场条件时，能够快速在数据库中选择最适合的推断方法。

虽然推断血迹遗留时间的研究在过去几十年里取得了显著进展，但大多现有技术仍局限于实验室条件，需要更多实际案例验证其可靠性。

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In the pursuit of the holy grail of forensic science — Spectroscopic studies on the estimation of time since deposition of bloodstains

2018

... 血迹是暴力犯罪现场最重要的物证之一.通过血迹形态分析、DNA分析能够还原犯罪现场、确定与暴力犯罪过程相关的人员，但通过血迹准确推断案件发生时间仍然是一个难题.现场血迹遗留时间（老化时间）通常指从血液通过破损血管转移至现场客体开始至该血迹被侦查发现的时间间隔.现场血迹遗留时间的推断可以帮助推断损伤的发生时间，从而还原暴力事件的案发时间，为缩小侦查范围提供重要依据.早在100多年前，就有研究人员尝试推断血迹遗留时间[1].1910年，LEERS[2]提出了血液老化的生理学基础，使血迹遗留时间推断有了理论支撑.此后，血迹遗留时间推断的新理论与新方法不断涌现，逐渐形成了基于图像特征、生物化学特征的血迹遗留时间推断方法.本文拟对该领域主要方法进行总结，以期为血迹遗留时间推断的进一步研究提供参考和启示. ...

... 现场的温度、湿度、光照、空气流通、环境微生物等因素均会对血迹的体外降解产生影响，是建立通用的血迹遗留时间推断方法最主要的障碍之一[1]，其中温度与湿度对血液体外降解的影响最大.温度升高会加速血液物质降解，HANSON等[23]发现，温度升高不仅提高了血迹降解的速率，还增加了血迹降解的程度.BREMMER等[57]发现，血红蛋白自氧化生成高铁血红蛋白的过程不受湿度影响，而高铁血红蛋白降解为血红蛋白的过程则高度依赖于湿度.HENEGHAN等[51]分析了环境温度和湿度对血迹RNA降解速率的影响，发现温度或湿度的升高以相近的程度加速血迹RNA的降解.然而，ZHANG等[34]使用拉曼光谱法分析温度、湿度对血迹体外降解过程中光谱峰的影响，发现温度的升高会加速光谱峰的变化，而湿度的增加总体上减缓了光谱峰的变化. ...

1910

立体显微镜下依据滴落状血迹干燥度推断伤亡时间

2013

... 温永启[3]使用立体显微镜观察了滴落血迹在24 h内的变化，结果发现，血迹干燥过程中的特征指标，如干燥纹线、内外环形成与时间关联性强，干燥规律稳定可靠.钱尊磊等[4]对血迹72 h内的干燥情况进行拍照观察，运用ImageJ图像处理软件量化分析平均灰度值、血池比率和裂纹比率3项特征性指标与遗留时间的相关性，建立了上述特征性指标随时间变化的回归方程.CHOI等[5]使用手机对血迹干燥过程进行拍照分析，选取裂纹、血池（液态血液区域）、颜色3项特征指标，在48 h内成功判定了血迹的遗留时间，可准确区分血迹图像差异. ...

... 附表1汇总了基于图像特征推断血迹遗留时间的相关文献[3-7，9]，这些方法能快速分析现场血迹，但结果可能受到光源、成像工具和血液供体等多种因素的影响.因此，在实际应用中，需要综合考虑各种因素，以提高判断的准确性. ...

Inferring casualty time according to the dryness of dripping bloodstains under stereomicroscope

2013

基于Image J软件的血迹遗留时间推断研究

2023

Research on bloodstain age inference based on Image J software

2023

Highly sensitive and accurate estimation of bloodstain age using smartphone

2019

Age estimation of bloodstains using smartphones and digital image analysis

2013

... 血液离开人体后由于血红蛋白的氧化，颜色逐渐加深，由鲜红色逐渐变成深红色直至黑褐色.肉眼对于颜色的灵敏度有限，因此有学者尝试通过红绿蓝色彩模式（RGB）、印刷四分色模式（CMYK）、色相-饱和度-明度（HSV）色彩模式等血迹颜色参数推断血迹遗留时间.此类方法可嵌入手机或其他移动终端，实现血迹遗留时间现场快速推断.THANAKIATKRAI等[6]使用手机对不同客体的血迹进行拍照，提取血迹图像的CMYK色值进行时间相关性分析，推断42 d内的血迹，误差率为12%.SHIN等[7]研发了一种便携式勘察设备（Smart Forensic Phone），将血迹的RGB值转换为HSV色彩模式中的V值，根据V值与时间的曲线计算血迹遗留时间，血迹遗留时间低于42 h时，此方法有较高的准确率.郑吉龙等[8]研发出一体化微量血痕成像及遗留时间分析装置，能动态监测血迹6项颜色参数（RGB中的R、G、B与CMYK中的C、Y、M）随时间的变化，并建立了多参数方程进行血迹遗留时间推断，该装置在密闭环境下的准确率可达95%. ...

... 此外，不同的光源以及照射时间等多种光照因素均对血迹体外降解过程有一定影响.THANAKIATKRAI等[6]和FUJITA等[58]在实验中发现，阳光照射可以加速血迹体外降解的过程，然而BAUER等[44]发现，阳光照射对血迹体外降解过程没有显著影响. ...

... 在准确控制温度与湿度的条件下，现有方法均有良好的准确率，其中光谱法表现最为出色.在避光条件与荧光灯照射条件下，颜色参数方法表现出相同的准确率，但均高于阳光直射条件下的准确率[6，9].然而拉曼光谱法光照条件下的准确率却高于避光条件[34]. ...

... 犯罪现场发现的血迹会滴落在不同类型的客体上，可分为渗透性客体、半渗透性客体和非渗透性客体三类.有研究[6，28，33]比较了不同客体对血迹遗留时间推断的影响，结果表明，血液在渗透性客体上的干燥速度更快，血液与客体的相互作用可能会导致血液体外分解产物更加复杂.底物的颜色对光谱分析法推断结果通常具有较大影响.EDELMAN等[27]评估了彩色棉花客体对近红外光谱推断血迹遗留时间的影响，1个月内的推断均方根误差为8.9%，但其只能应用于不同颜色的棉花客体，并不能直接用于其他客体.BERGMANN等[59]提出使用蒸馏水溶解不同客体上的血迹，再使用吸收光谱分析推断血迹遗留时间，从而达到忽略客体影响的目的.GIULIETTI等[19]利用高光谱成像技术开发了一个不依赖客体的血迹形成时间推断模型，在385 h内有较低的平均绝对误差.实验室研究常用铝板[31，34，60]、玻璃[28-29，61-62]、棉织物[44，49-50，58，63]、纸张[10-13，15，58]等作为血迹客体. ...

... BAUER等[44]通过研究证实，抗凝剂EDTA对RNA降解没有显著影响，是因为二价阳离子对核糖核酸酶的影响远低于对脱氧核糖核酸酶或其他DNA和RNA修饰酶的影响，同时，干燥血迹中的RNA片段化可能是由物理影响或自然氧化造成的，而非核糖核酸酶的直接作用.BERGMANN等[25]使用紫外-可见光谱法探讨EDTA随时间推移对血液光谱的实际影响，发现EDTA对氧合血红蛋白向高铁血红蛋白的转化具有显著影响，而对高铁血红蛋白向血红蛋白的转化有轻微影响，即EDTA可以延缓血液的老化.THANAKIATKRAI等[6]的研究发现，在使用颜色参数推断血迹形成时间的过程中，EDTA与肝素不会对实验结果产生影响.可见，抗凝剂对血迹老化过程存在不确定性，不同的抗凝剂对不同方法也有不一样的影响.因此，在不能确定抗凝剂是否对某检测方法存在影响时，最好使用不添加抗凝剂的血液作为研究样品，尽量缩短从血液采集到制作血液样本的时间. ...

Smart Forensic Phone： Colorimetric analysis of a bloodstain for age estimation using a smartphone

2017

一体化微量血痕成像及遗留时间分析装置的研发

2019

... 通风环境会加速血液的干燥过程，郑吉龙等[8]研发的一体化微量血痕成像及遗留时间分析装置在通风环境下的推断准确率显著低于密闭环境. ...

Development of integrated device of trace bloodstains imaging and age analysis

2019

... 通风环境会加速血液的干燥过程，郑吉龙等[8]研发的一体化微量血痕成像及遗留时间分析装置在通风环境下的推断准确率显著低于密闭环境. ...

血痕颜色时序性变化的实验性研究

2018

Experimental study on the time regularity of color changes of blood stains

2018

Bloodstain metabolite markers： Discovery and validation for estimating age of bloodstain within 7 days

2022

... 色谱法是利用不同组分与固定相和流动相之间的作用力的差别实现各组分相互分离的分析方法.随着代谢组学的发展，人们对血液小分子代谢路径底物和产物的了解不断加深，研究人员尝试通过色谱-质谱技术定性描述和定量表征血液基质中小分子代谢组，以阐明血液成分与血迹遗留时间的关系.与大分子母体物质相比，血液中的代谢或降解产物往往在相对更长的时间内具有更好的稳定性，因此，代谢产物分析在血液遗留时间推断方面具有比母体物质更大的潜力[10].附表2汇总了色谱法推断血迹遗留时间的相关文献[10-15]. ...

... [10-15]. ...

... LEE等[11]使用LC-MS/MS对血液中的麦角硫因进行分析，证实了其可以用于血迹遗留时间推断，并能判断血迹是否形成21 d以上.SEOK等[12]使用HPLC-MS/MS分析了21 d内的血迹代谢物变化情况，发现焦谷氨酸、L-异亮氨酸、次黄嘌呤、L-色氨酸、麦角硫因5种代谢物浓度随着时间的推移规律性增加或减少，首次利用代谢组学方法寻找血迹遗留时间的标志物.2022年，LEE等[10]利用LC-MS/MS分析了7 d内血迹中多种代谢物含量的变化情况，选择N-乙酰半胱氨酸、焦谷氨酸、L-谷氨酰胺、腺苷酸二钠盐作为标志物，各标志物含量随血迹遗留时间的延长呈规律性下降.HEO等[13]使用LC-MS/MS分析了血液中血红蛋白β亚单位随时间的变化，结果显示，β蛋白的表达随时间逐渐增加，最终得到了30 d内血迹中β蛋白含量图，可以此推断血迹遗留时间.SCHNEIDER等[14]使用HPLC-MS分析了56 d内的血迹样本，采用蛋白质组学技术研究干燥血迹中蛋白质组含量的时间依赖性变化，这些蛋白质显示出不同的遗留时间聚类，该研究还建立了基于肽水平的推断模型，平均推断性能在70%~130%. ...

Validation of the metabolite ergothioneine as a forensic marker in bloodstains

2022

Estimation of age of bloodstains by mass-spectrometry： A metabolomic approach

2018

Hemoglobin subunit beta protein as a novel marker for time since deposition of bloodstains at crime scenes

2022

... （1）色谱法.湿度越高（30%~90%）准确率越高[13，15]，但在相对湿度90%的条件下，血迹存在被真菌感染的可能性，会对推断结果造成较大影响[13]. ...

... [13]. ...

Determination of the time since deposition of blood traces utilizing a liquid chromatography-mass spectrometry-based proteomics approach

2022

Effect of environmental conditions on bloodstain metabolite analysis

2023

... （1）色谱法.湿度越高（30%~90%）准确率越高[13，15]，但在相对湿度90%的条件下，血迹存在被真菌感染的可能性，会对推断结果造成较大影响[13]. ...

2005

... 光谱分析法是利用血液中物质对电磁辐射的吸收或发射现象确定物质的结构和化学成分的分析方法.血液在体外降解的过程中，血红蛋白、高铁血红蛋白和氧合血红蛋白之间的比例不断发生变化，导致血液颜色由鲜红色转变为暗红色，受此启发，许多研究人员利用光谱技术分析血液成分随时间的变化规律，进而推断血迹的遗留时间.光谱技术能够在短时间内生成大量的数据，对血迹的物理化学性质作出详细描述.其获得的光谱数据是血液中所有光学活性成分与其浓度加权的叠加，由于全血中红细胞的光学特性比其他血液成分高2~3个数量级，且血红蛋白占红细胞干重的90%，故血液光谱变化主要反映的是血红蛋白的变化规律[16-17].因此，如何从大量数据中提取有用的信息，是光谱法推断血迹遗留时间所面临的一大难题.为了解决这个难题，大部分研究人员采用化学计量学方法以快速、准确地提取有用的信息.同时，由于大部分光谱法具有无损、非接触、简单、快速等显著优点，使得光谱技术在血迹遗留时间推断中的应用较为普及[18].附表3汇总了光谱法推断血迹遗留时间的相关文献[19-36]. ...

Optical properties of platelets and blood plasma and their influence on the optical behavior of whole blood in the visible to near infrared wavelength range

2007

TrACES of time： Transcriptomic analyses for the contextualization of evidential stains — Identification of RNA markers for estimating time-of-day of bloodstain deposition

2023

Neural network based hyperspectral imaging for substrate independent bloodstain age estimation

2023

... 高光谱成像技术是一种基于窄波段的影像数据技术，将成像技术与光谱技术相结合，探测目标的二维几何空间及一维光谱信息，获取高光谱分辨率的连续、窄波段的图像数据.GIULIETTI等[19]通过高光谱成像技术测定385 h内的血迹，建立了血迹形成时间推断模型，绝对误差小于6.9 h. ...

The age estimation of blood stains up to 30 days old using visible wavelength hyperspectral image analysis and linear discriminant analysis

2013

Dating bloodstains with fluorescence lifetime measurements

2012

... 荧光分子受到较短波长的光照射后，会吸收能量并将其储存起来，随后，储存的能量会以较长波长的荧光形式缓慢释放出来.荧光寿命是指荧光分子从受激发后到荧光消失的时间，是荧光物质的固有属性，会受到其所处微环境的影响.血液蛋白质中主要内源性荧光团为色氨酸，其荧光寿命对蛋白质构象高度敏感[37].在血迹体外降解过程中，血液蛋白（如白蛋白、丙种球蛋白）发生结构变化，导致色氨酸荧光寿命减少[38].据此，GUO等[21]利用犬血提出了一种基于血液荧光寿命推断血迹遗留时间的方法，结果表明，血液体外分解过程是非线性的，荧光寿命从新鲜血液的4.0 ns降低到2个月血迹的2.5 ns，在前150 h荧光寿命变化最为剧烈，约300 h后达到平稳.GUO等[39]在另一项研究中证实，利用荧光寿命推断血迹遗留时间时，犬血可作为人血替代物，同时改进了先前基于溶液的测定方法，使其对干燥血液同样适用.SHINE等[22]使用荧光寿命分光荧光仪检测1 200 h内的血迹荧光寿命，能够在91 h内准确区分新旧血液. ...

The applicability of fluorescence lifetime to determine the time since the deposition of biological stains

2017

A blue spectral shift of the hemoglobin soret band correlates with the age （time since deposition） of dried bloodstains

2010

... 利用物质在紫外及可见光谱区域的吸收特性而建立的分析方法称为紫外-可见分光光度法.该方法可以区分蛋白质中肽键、侧链上的氨基酸以及辅基3种不同类型的发色团.辅基中往往含有卟啉结构，在紫外-可见光谱区域内存在Q波段和Soret波段.因原卟啉环与周围环境的相互作用，血红蛋白的紫外-可见光谱表现出高度敏感的特点，可以用来推断血迹遗留时间[40].HANSON等[23]建立了一种利用血红蛋白紫外-可见光谱推断血迹遗留时间的方法，随着时间的增加，血红蛋白Soret波段出现蓝移（蓝移的程度是环境相对湿度和温度的函数）.COSSETTE等[24]使用可见光谱对15 d内的血迹进行检验，发现Soret波段和alpha波段的最大吸光度波长随时间呈负增长趋势. ...

... （2）紫外-可见光谱法.温度一定时，湿度越低（相对湿度50%~90%）准确率越高；相对湿度一定时（50%），温度22 ℃条件下的准确率最高[23]. ...

Quantifying visible absorbance changes and DNA degradation in aging bloodstains under extreme temperatures

2021

... 不同推断方法有各自的缺点与优点，可以将不同方法联用，使其结果相互印证，以得到更准确的推断结果.COSSETTE等[24，30]将DNA浓度和血红蛋白的吸光度整合到单一模型中，R²最高可达0.84. ...

Analysis of the influence of EDTA-treated reference samples on forensic bloodstain age estimation

2021

基于ATR-FTIR光谱技术研究血痕形成的时序性变化

2020

... 物质吸收特定波长的光能引起分子振动和转动能级跃迁，产生红外吸收光谱.利用红外光谱进行定性定量分析的方法称为红外光谱法.不同官能团产生的吸收谱带位置不同，故该方法可有效鉴定有机化合物并进行结构分析.使用红外光谱法可以对血迹中的蛋白质进行结构与含量变化分析，推断其与时间的依赖关系.吴雪梅等[26]使用衰减全反射傅里叶变换红外光谱法（attenuated total reflection-Fourier transform infrared spectroscopy，ATR-FTIR）采集血液光谱数据，发现3 d内血迹的老化过程可明显分为干燥和分解两个阶段.干燥阶段，光谱变化主要是由于血液中水分的挥发，约40 min后血迹完全干燥进入分解阶段，该阶段的光谱变化不明显.EDELMAN等[27]使用近红外光谱法对77 d内的血迹进行测定，建立了偏最小二乘回归模型.KUMAR等[28]利用ATR-FTIR技术结合化学计量方法，基于175 d内血迹的训练数据集，建立了多种血迹遗留时间的推断模型，其中多元线性回归、偏最小二乘回归模型的误差分别为2~4 d和3~5 d. ...

Study on the time-dependent changes of blood stain formation using ATR-FTIR spectroscopy

2020

Identification and age estimation of blood stains on colored backgrounds by near infrared spectroscopy

2012

Bloodstain age estimation through infrared spectroscopy and Chemometric models

2020

... [28-29，61-62]、棉织物[44，49-50，58，63]、纸张[10-13，15，58]等作为血迹客体. ...

Estimation of the age of human bloodstains under the simulated indoor and outdoor crime scene conditions by ATR-FTIR spectroscopy

2017

An exploratory time since deposition analysis of whole blood using metrics of DNA degradation and visible absorbance spectroscopy

2020

Predicting the time of the crime： Bloodstain aging estimation for up to two years

2017

... 拉曼光谱法是应用拉曼散射效应，对与入射光频率不同的散射光谱进行分析，以得到分子振动、转动方面的信息，并应用于分子结构研究的一种分析方法.拉曼光谱技术无需样品处理就能提供有关结构与分子变化的直接信息，故在法庭科学领域拥有良好的应用前景.拉曼光谱对血红素的化学修饰以及血红蛋白的变性与聚集转化十分敏感，在血迹检验方面具有独特优势[31].LEMLER等[41]使用拉曼光谱分析发现，血迹形成2周后，在667、747和1 248 cm-1处出现新的谱带，而在419、570和1 638 cm-1处的Fe-O2标记消失.DOTY等[32]采用拉曼光谱技术结合二维相关光谱和统计建模方法，对保存1个月至2年的血迹进行分析，结果表明，特定拉曼带和血迹遗留时间之间有很高的相关性，能够在一定范围内区分新旧血迹.GAUTAM等[33]利用拉曼光谱分析了遗留2周的血迹，得到的特异性回归模型获得了较低的推断均方根误差和较高的R2. ...

A Raman “spectroscopic clock” for bloodstain age determination： The first week after deposition

2016

Feature selection and rapid characterization of bloodstains on different substrates

2020

Age estimation of bloodstains based on Raman spectroscopy and chemometrics

2023

... （3）拉曼光谱法.温度改变（4~37 ℃）对结果的规律性影响不大，湿度太高或太低均会降低准确率[34]. ...

The estimation of the age of a blood stain using reflectance spectroscopy with a microspectrophotometer， spectral pre-processing and linear discriminant analysis

2011

... 在漫反射光谱中，光源发射的光线照射到物质表面，一部分光线被表面直接反射回来，另一部分光线则进入物质内部并被散射.这些散射光的光谱信息携带着关于物质分子结构和性质的信息.通过收集和分析这些光谱信息，可以推断出物质的分子结构、化学键类型、官能团等.BREMMER等[42]使用可见漫反射光谱法通过多组分光谱拟合技术，精确量化血迹中发色团的含量，建立了发色团含量与血迹遗留时间的关系.LI等[35]使用可见漫反射光谱分析37 d内的马血，建立了推断1~37 d血迹遗留时间的线性判别模型，准确识别率最高达99.2%. ...

Accurate age estimation of bloodstains based on visible reflectance spectroscopy and chemometrics methods

2017

Fluorescence lifetime measurements and biological imaging

2010

Blood degradation and bloodstain age estimation

2017

Bloodstain age analysis： Toward solid state fluorescent lifetime measurements

2013

Band assignment in hemoglobin porphyrin ring spectrum： Using four-orbital model of Gouterman

2010

NIR Raman spectra of whole human blood： Effects of laser-induced and in vitro hemoglobin denaturation

2014

Age estimation of blood stains by hemoglobin derivative determination using reflectance spectroscopy

2011

UV-Visible spectroscopic effect on haemoglobin & DNA degradation： A forensic approach

2020

... 随着分子生物学的发展，研究人员发现血液细胞中一些分子水平（如DNA、mRNA）的变化与时间密切相关.血液完全干燥后，失去了DNA降解反应的溶剂环境，从而抑制了微生物的进一步分解活动[43]，故在血迹中，DNA的稳定性远高于血红蛋白的稳定性.有研究[44-45]证实，可以从多年的血迹中提取出适合进行PCR分析的RNA.血液细胞体外死亡后，DNA、RNA会在内源性核酸酶、水解酶的作用下降解.根据遗传物质的降解规律，可使用实时荧光逆转录定量聚合酶链反应（reverse transcription-quantitative polymerase chain reaction，RT-qPCR）检测血液细胞中的遗传物质，推断血迹遗留时间.ANDERSON等[46]认为，不同种类RNA在体外降解速率不同，并将其降解速率的不同归因于结构差异，如β-actin mRNA不与任何蛋白复合物结合，不具有环境保护作用，而18S rRNA在较大的核糖体结构中受到保护，不易降解，为使用实时荧光定量PCR法推断血迹遗留时间提供了理论基础.之后ANDERSON等[47]利用多重RT-qPCR技术证明了对不同RNA片段变化率的多变量分析可以用于区分不同遗留时间的血迹.附表4汇总了使用实时荧光定量PCR方法推断血迹遗留时间的相关文献[44，47-51]. ...

Quantification of RNA degradation by semi-quantitative duplex and competitive RT-PCR： A possible indicator of the age of bloodstains?

2003

... [44，47-51]. ...

... （4）实时荧光定量PCR法.在温度4~37 ℃、湿度10%~75%条件下，温度越高，湿度越高，其推断效果越好[51].短期的紫外线照射不会对推断结果造成显著影响[44]. ...

Identification of aged bloodstains through mRNA profiling： Experiments results on selected markers of 30- and 50-year-old samples

2017

A method for determining the age of a bloodstain

2005

Multivariate analysis for estimating the age of a bloodstain

2011

... ，47-51]. ...

应用RNA分析技术推断现场血痕形成时间

2010

... CHENG等[52]采用RT-qPCR技术检测血迹中节律性mRNA含量，建立了其与时间的回归模型，平均绝对误差为3.92 h.许炎等[48]利用RT-qPCR技术检测18S rRNA和β-actin mRNA的扩增状况并对产物进行定量分析，通过检测这两种目标物含量的变化趋势推测血迹遗留时间，结果显示，8~15 d内，18S rRNA与β-actin mRNA的比值与死亡时间存在一定的线性关系.QI等[49]也利用RT-PCR技术检测了存放4周内血迹中18S rRNA和β-actin mRNA的含量，发现两者的比值与时间呈线性关系.WEI等[50]利用RT-qPCR技术检测血迹中高表达的circRNA、内参基因及血液特异性mRNA标志物的相对表达水平，结果显示，circRNA和mRNA均呈线性持续降解，最终得到使用特殊RNA相对表达水平推断血迹遗留时间的模型，R2 最高可达0.907. ...

Determination of bloodstain formation time by RNA analysis

2010

Gender-related difference in bloodstain RNA ratio stored under uncontrolled room conditions for 28 days

2013

... 时间固然是血液体外分解过程中的重要影响因素，但其并非唯一的决定性因素，其他诸如温度、湿度、客体、环境中的微生物[53]以及血液供体[49，54-56]等同样在血液体外分解的过程中起着至关重要的作用.实验室条件与实际应用场景的差异也降低了部分结果的可信度.如何量化并消除客观因素对推断结果的影响是解决推断误差的关键所在. ...

The estimation of bloodstain age utilizing circRNAs and mRNAs biomarkers

2022

The effect of environmental conditions on the rate of RNA degradation in dried blood stains

2021

Estimation of bloodstain deposition time within a 24-h day-night cycle with rhythmic mRNA based on a machine learning algorithm

2023

Exploring the limits for the survival of DNA in blood stains

2010

Carboxyhemoglobin levels in patients with sickle-cell anemia： Relationship to hemolytic and vasoocclusive severity

2001

Carbon monoxide in breath in relation to smoking and carboxyhaemoglobin levels

1981

Absorption， transport， distribution in tissues and bioavaila-bility

2009

Biphasic oxidation of oxy-hemoglobin in bloodstains

2011

Estimation of the age of human bloodstains by electron paramagnetic resonance spectroscopy： Long-term controlled experiment on the effects of environmental factors

2005

... ，58]等作为血迹客体. ...

Towards substrate-independent age estimation of blood stains based on dimensionality reduction and k-nearest neighbor classification of absorbance spectroscopic data

2017

Age estimation of bloodstains： A preliminary report based on aspartic acid racemization rate

2011

Age determination of blood spots in forensic medicine by force spectroscopy

2007

Time-dependent surface adhesive force and morphology of RBC measured by AFM

2009

Short and long time bloodstains age determination by colorimetric analysis： A pilot study

2021

血迹遗留时间推断技术现状与展望

丁俊晖世界杯2018：从单打王到团队战的成长故事